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如何科學挑選適用的ELISA試劑盒?實驗人必看的避坑指南

日期:2025-06-10瀏覽:263次

一、明確檢測目標?

1.檢測對象是什么??

明確待測物是細胞因子、激素、病毒抗體還是其他蛋白。不同試劑盒針對的抗原表位和抗體對可能不同。

關鍵點:查看試劑盒說明書中的“檢測范圍"和“交叉反應",確認是否覆蓋你的目標物種和異構體(如人/小鼠/大鼠)。

 

2.需要定量還是定性??

定量試劑盒需提供標準品和標準曲線,適合精確測量濃度;定性試劑盒(如診斷用)通常只判斷陰陽性。

 

二、匹配樣本類型?

不同樣本的處理方式可能影響檢測結果:

血清/血漿?:需避免溶血、脂血(可能引起非特異性結合)。

細胞培養(yǎng)上清?:注意培養(yǎng)基中是否含高濃度BSA或胎牛血清(可能干擾檢測)。

組織裂解液?:需驗證裂解緩沖液成分是否與試劑盒兼容(如避免強去垢劑)。

提示:試劑盒說明書會標注已驗證的樣本類型,若使用特殊樣本(如腦脊液、唾液),建議先做預實驗驗證。

 

三、選擇試劑盒類型

?ELISA有四大常見類型,適用場景不同:

類型

?原理

?適用場景?

雙抗體夾心法

雙抗體捕獲抗原

大分子(如IL-6、TNF-α)

競爭法

雙抗體捕獲抗原

小分子(如皮質醇、藥物)

間接法

樣品抗原與標記抗原競爭

檢測抗體(如血清抗體)

直接法

酶標記一抗

快速檢測,步驟簡化

 

優(yōu)先選擇夾心法(靈敏度高、特異性強),但小分子只能選競爭法。

 

四、評估試劑盒性能?

1.靈敏度與檢測限?

靈敏度(最-低檢測濃度)和檢測范圍需覆蓋你的樣本濃度。例如:檢測血清細胞因子時,若樣本濃度低,需選擇高靈敏度試劑盒(如靈敏度≤1 pg/mL)。

 

2.批間差與穩(wěn)定性?

查看廠商是否提供不同批次的CV(變異系數(shù))數(shù)據(jù),批間差應<15%。避免因批次差異導致實驗重復性差。

 

3.抗體對來源?

單克隆抗體特異性高但可能識別單一表位;多克隆抗體靈敏度高但需驗證交叉反應。建議選擇經(jīng)Western Blot或質譜驗證的抗體。

 

五、驗證與優(yōu)化?

陽性/陰性對照?:試劑盒應提供明確對照,用于判斷實驗有效性。

回收率實驗?:在樣本中加入已知濃度標準品,回收率應在80%-120%。

重復性測試?:同一樣本重復3次檢測,CV值應<10%。

 

若背景信號過高,可嘗試:縮短顯色時間、優(yōu)化封閉液(如使用5%脫脂奶粉)、增加洗滌次數(shù)。

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