一、轉染基礎概念

細胞轉染是將外源核酸（DNA/RNA）導入真核細胞的技術，分為瞬時轉染（外源基因短期表達）和穩(wěn)定轉染（基因整合至基因組長期表達）兩類。核心應用包括基因功能研究、蛋白表達及基因治療開發(fā)。

二、常用轉染方法對比

三、標準化操作流程（以脂質體法為例）

細胞準備：接種對數(shù)生長期細胞，密度達70%-90%匯合。

復合物制備：

無血清培養(yǎng)基稀釋質粒DNA與轉染試劑（如Lip2000）。

室溫靜置15分鐘形成DNA-脂質體復合物。

轉染執(zhí)行：

移除原培養(yǎng)基，加入復合物輕搖混勻。

4-6小時后更換含血清完-全培養(yǎng)基。

結果檢測：24-72小時通過熒光顯微鏡或Western Blot驗證表達。

四、關鍵注意事項

血清干擾：轉染階段需使用無血清培養(yǎng)基（如Opti-MEM）。

細胞狀態(tài)：優(yōu)先選擇傳代次數(shù)少、活力>90%的細胞。

毒性控制：脂質體與DNA比例需預實驗優(yōu)化（推薦1:1至3:1）。